ELISA (Enzyme linked immunosorbent assay) adalah teknik biologis berdasar imunoreaksi antigen dan antibodi serta reaksi katalitik enzim yang efisien. Teknik ini digunakan untuk analisis kualitatif dan kuantitatif protein target dalam sampel seperti serum, plasma, homogenat jaringan, cell culture, dan cairan biologis lainnya.

Kit ELISA berisi komponen lengkap yang dapat digunakan untuk percobaan atau penelitian anda. Penelitian dengan ELISA Kit relatif mudah, tahapan pengerjaannya dapat anda lihat pada manual data sheet dalam kit tersebut. Jika pengerjaan dengan ELISA ini merupakan yang pertama, sebaiknya anda melakukan pra-percobaan atau optimasi dahulu. Untuk sampel yang akan diuji sebaiknya anda uji dengan melakukan optimasi sampel. Misalkan sampel perlu diencerkan atau tidak.

Lalu bagaimana melakukan Pra-percobaan atau optimasi dengan ELISA kit?

1. Lihatlah pada data sheet atau manual kit insert untuk preparasi sampel. Sekiranya tidak disebutkan, silahkan menghubungi supplier ELISA kit yang anda pesan.
2. Siapkan semua reagent dalam kit sesuai dengan spesifikasi manual protokol. Uji optimasi biasanya menggunakan 2 strip well plate (16 well) lihat gambar di bawah ini.
   Sebagai contoh kita ambil dari kit Cusabio CSB-E04505m Mouse Brain derived neurotrophic factor, BDNF ELISA Kit. Nilai OD (Optical density) standard yaitu sebagai berikut:
   

   Standard	OD	Konsentrasi (pg/ml)
   S7	2.0365	1000
   S6	1.4281	500
   S5	0.9769	250
   S4	0.5931	125
   S3	0.3641	62.5
   S2	0.2563	31.2
   S1	0.2279	15.6
   S0	0.1529	0

   Kode S0 – S7 merupakan variasi dari standard dengan konsentrasi mulai dari 0 sampai 1000pg/ml.

   Sampel yang diuji disini merupakan jaringan otak mencit, dengan kode K1 dan M1. Perbedaan waktu pengenceran dipilih sebagai pra-percobaan. Berikut nilai OD pada sampel tersebut.
   

   Kode Sampel	Faktor Pengenceran	OD	Konsentrasi
   K1	Tanpa pengenceran	1.2293	380.80641
   	10	0.3141	418.84472
   	100	0.1507	-
   	1000	0.1325	-
   M1	Tanpa pengenceran	1.0488	291.60631
   	10	0.2661	303.33879
   	100	0.1446	-
   	1000	-	-

3. Buat kurva standar nilai OD dan konsentrasi standard menggunakan software Curve Expert 1.4, sebagai berikut (detail dapat dilihat pada link ini)
   
   Kurva standar sangat penting untuk mendapatkan hasil analisis ELISA yang akurat. Oleh karena itu, Anda harus menjalankan standar di setiap pengujian untuk menghindari penyimpangan sistematis yang disebabkan oleh perbedaan operator, pemipetan, inkubasi, dan suhu setiap pengujian.Konsentrasi sampel yang akan diuji dapat diperoleh dengan memasukkan nilai OD sampel ke dalam rumus. (Bagi yang memiliki kelipatan pengenceran, Anda perlu mengalikan kelipatan pengenceran).

   Pilihlah konsentrasi dimana sampel yang diuji menunjukan nilai terendah pada kurva. Pada percobaan dengan sampel jaringan otak dengan kit CSB-E04505m, sampel tanpa pengenceran dapat dipertimbangkan untuk percobaan selanjutnya.

4. Faktor pengenceran sampel yang sesuai ditentukan dengan optimasi ini, selanjutnya anda dapat mengerjakan ELISA sesungguhnya. Tahapan detail harus mengacu pada protokol yang relevan, ini dapat anda tandai. Tata letak spesifik dapat dilihat sebagai berikut.
   
   Catatan: Metode ELISA kompetitif sedikit berbeda, anda harus mengikuti detail instruksi atau tahapannya.

Sumber:
1. How to Do The Pre-experiment before Your ELISA Experiment
2. Curve Expert 1. 4 software