Fiksasi mengimobilisasi antigen sembari mempertahankan struktur seluler dan subseluler. Metode fiksasi yang digunakan akan tergantung pada sensitivitas epitop dan antibodi itu sendiri dan mungkin memerlukan beberapa optimasi.
Fiksasi dapat dilakukan dengan menggunakan reagen pengikat silang (crosslinking reagent) seperti paraformaldehyde. Ini lebih baik dalam menjaga struktur sel tetapi dapat mengurangi antigenisitas beberapa komponen sel karena ikatan silang dapat menghalangi pengikatan antibodi. Teknik antigen retrieval mungkin diperlukan, terutama jika ada waktu inkubasi fiksasi yang lama atau jika persentase fiksatif pengikat silang yang digunakan tinggi.
Lebih jauh, Paavilainen, dkk (2010) menambahkan bahwa neutral-buffered formalin (NBF) adalah pengikat silang yang memperbaiki jaringan dengan menginduksi jembatan metilen antara asam amino dan juga antara asam amino dan nukleotida. Perlakuan jaringan oleh NBF dilakukan untuk memberikan gambaran rinci tentang morfologi seluler untuk ahli patologi klinis menganalisis lanskap histologis. Selain itu, bersama dengan antigen retrieval yang diinduksi panas (HIAR; heat-induced antigen retrieval), formalin umumnya memungkinkan immunostaining berkualitas tinggi, sehingga banyak digunakan dalam diagnostik klinis.
Neutral buffered formalin atau biasa disingkat NBF10% saja, paling umum digunakan di laboratorium patologi anatomi. Umumnya jika pada datasheet dinyatakan IHC-P sebagai aplikasi yang diuji, fiksatif ini telah digunakan kecuali dinyatakan lain. Ada juga fiksatif lain seperti larutan Bouin (paraformaldehyde/asam pikrat) tapi lebih jarang digunakan.
Waktu fiksasi yang ideal akan tergantung pada ukuran blok jaringan dan jenis jaringan, tetapi waktu fiksasi biasanya antara 18-24 jam untuk sebagian besar aplikasi. Kurang waktu fiksasi dapat menyebabkan pewarnaan tepi, dengan sinyal kuat di tepi bagian dan tidak ada sinyal di tengah. Fiksasi berlebihan dapat menutupi epitop; antigen retrieval dapat membantu mengatasi penyamaran ini, tetapi jika jaringan telah disimpan untuk jangka waktu yang lama (misalnya selama sepekan), mungkin tidak ada sinyal bahkan setelah antigen retrieval.
Metode fiksasi lainnya yaitu fiksasi perfusi dan frozen fixation.
NBF adalah larutan yang terdiri dari formaldehida (37 hingga 40% (b/v) yang diencerkan menggunakan buffer fosfat pada pH netral. NBF 10% adalah fiksatif histologis tujuan umum yang banyak digunakan dalam mempersiapkan sampel untuk mikroskop cahaya. Ini sangat cocok untuk fiksasi sampel jangka pendek tetapi juga efisien untuk penyimpanan jaringan jangka panjang dan kompatibel dengan target seperti protein dengan berat molekul rendah, peptida, dan enzim.
Paavilainen, dkk (2010) menyimpulkan bahwa fiksatif yang paling umum digunakan, NBF, berkinerja baik sebagai fiksatif untuk jaringan, meskipun fiksatif alternatif komersil mungkin lebih menguntungkan untuk deteksi dan visualisasi protein tertentu menggunakan aplikasi yang berbeda.
NBF telah menjadi fiksatif “gold standard” selama beberapa dekade. NBF memungkinkan penyimpanan bahan bedah jangka panjang dan mempertahankan jaringan dan sel dengan morfologi yang detail dan tajam yang membentuk dasar untuk diagnostik mikroskopis. Karena NBF telah menjadi fiksatif standar, antibodi yang digunakan untuk diagnostik IHC telah dikembangkan untuk mendeteksi epitop protein dalam bentuk jaringan Formalin-fixed, paraffin-embedded (FFPE). Penemuan teknik antigen retrieval, khususnya HIAR, telah memajukan penggunaan IHC, memungkinkan lebih banyak antibodi berbeda untuk digunakan dalam diagnostik rutin.
Larutan Medici NBF 10% dikembangkan secara khusus untuk digunakan dalam berbagai aplikasi histologis dan sitologis. Produk ini memiliki pH netral dan bebas dari kontaminan, sehingga meminimalkan ketidaknyamanan yang disebabkan oleh pewarnaan dan artefak latar belakang yang tidak spesifik. NBF 10% membentuk ikatan silang antara aldehid dan protein sampel penelitian yang mempertahankan struktur asli komponen seluler dan mempersiapkan sampel untuk prosedur pemrosesan dan pewarnaan yang berurutan.
Fitur :
Medici NBF 10% atau Neutral Buffered Formaldehyde 10% atau Buffer Formaldehyde 10 persen yang dijual oleh Indogen ada dalam beberapa ukuran yaitu 1L, 5L dan 19 Liter.
Anda dapat menghubungi kami via untuk mendapatkan penawaran harga terbaik,
atau anda dapat mengunjungi langung Tokopedia kami Beli Medici NBF10% di sini.
https://www.abcam.com/protocols/ihc-fixation-protocol
https://www.cephamls.com/10-neutral-buffered-formalin/
https://www.sigmaaldrich.com/ID/en/product/sigma/ht501128
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2825489/