Pilihan Format Assay Kit dari Cayman Chemical

Cayman menawarkan ratusan kit dengan sensitivitas tinggi dan andal dalam berbagai format untuk pemeriksaan biomarker, menilai kesehatan sel, skrining inhibitor dan mengukur aktivitas enzim.

Artikel ini mengulas beberapa format assay kit yang disuplai oleh Cayman Chemical misalnya saja ELISA, cell based assay, kit deteksi, aktivitas enzim dan assay skrining inhibitor.

A.   ELISA atau enzyme linked immunosorbent assay

Uji linked immunosorbent assay (ELISA) atau biasa disebut juga sebagai Enzyme Immunoassay (EIA) adalah uji imunologis yang biasa digunakan untuk mengukur antibodi, antigen, protein dan glikoprotein dalam sampel biologis. Beberapa contoh diantaranya adalah: diagnosis infeksi HIV, tes kehamilan dan pengukuran sitokin atau soluble receptor dalam supernatan sel atau serum. Pengujian ELISA umumnya dilakukan dalam 96 microwell plate, yang memungkinkan beberapa sampel diukur dalam sekali pemeriksaan. Plat ini harus merupakan plat absorbent khusus (misalnya Biofil 96 Microwell Plate) untuk memastikan antibodi atau antigen menempel pada permukaan plat. Setiap ELISA mengukur antigen spesifik dan kit untuk berbagai antigen tersedia di pasaran, salah satunya adalah ELISA Kit dari Cayman.

Assay kit dari Cayman memiliki sensitivitas tinggi, non radioaktif, mendeteksi target analit dalam media kultur sel dan matriks biologis menggunakan metode competitive ELISA, immunometric (misalnya Sandwich ELISA) atau pendekatan sekuen dsDNA (lihat gambar 1).

Gambar 1. Beberapa format ELISA Cayman

Topik Penelitian:

· Cyclic Nucleotides · Eicosanoids and Lipids · Environmental Disruptors · Hormones

· Immune Signaling Factors · Transcription Factors

Enzim Deteksi

Kit ELISA Cayman ELISA menggunakan konjugat HRP, AP atau AcHE sebagai reagen deteksi. Untuk tiap assay, Cayman memilihkan konjugat terbaik yang sesuai dengan assay yang bersangkutan.

Berikut merupakan perbedaan HRP atau Horseradish Peroxidase, AP atau Alkaline Phosphatase dan AChE atau Acetylcholinesterase.

HRP

Colorimetric Detection

Substrate: TMB

  • Rapid, kinetic reaction rate
  • Stop reaction and hold at
  • stable signal for up to 1 hour
  • Reacts with both soluble
  • and insoluble substrates
  • Sensitive
AP

Colorimetric Detection

Substrate: pNPP

  • More sensitive than HRP
  • Linear reaction rate
  • Stability of staining
  • Useful with high levels of
  • endogenous peroxidase
AChE

Colorimetric Detection Substrate: Ellman’s reagent

  • Fast turnover rate (3X faster than HRP or AP)
  • Active in a wide pH range (pH 5.0-10.0)
  • Does not self-inactivate during turnover
  • Enables redevelopment if assay is accidentally splashed or spilled

B.   Cell Based Assay atau Assay Berbasis Sel

Assay berbasis sel dari Cayman mencakup protokol yang detail dan telah diuji serta semua component reagent yang penting ada dalam boks kit, termasuk kontrol positif dan negatif (jika dibutuhkan).

Topik Penelitian:

· Nuclear Receptor Activity · Reactive Species · Proliferation and Cell Cycle Phase · Protein Synthesis · Cell Viability · Lipid Uptake · Metabolic Activity · Neutrophil Activity

Cell Based Assay kit dari Cayman tersebut tersedia untuk format pembacaan:

  • Flow Cytometer
  • Colorimetric Plate Reader
  • Fluorescence Microscope
  • Fluorescence Plate Reader or Time-Resolved Fluorescence

Gambar 2. Format pembacaan cell based assay Kit Cayman

C.   Detection Kit

Kit deteksi merk Cayman Chemical sudah lengkap dengan semua component kit yang dibutuhkan, baik kit dengan metode kolorimetri atau fluorometri, untuk mengukur biomolekul atau produk samping dari aktivitas sel. Kit ini berfungsi sebagai indikator yang sangat sensitif, secara selektif menargetkan aktivitas biologis yang normal atau biomarker penyakit tertentu di seluruh sel, cairan biologis ataupun jaringan.

Topik Penelitian:

· Cancer · Cardiovascular Disease · Cell Biology · Eicosanoids and Lipids · Immunology and Inflammation · Metabolism · Oxidative Damage

Gambar 3. Format pembacaan Detection Kit Cayman

D.   Aktivitas Enzim

Assay kit aktivitas enzim dari Cayman mengandung substrat dan indikator yang dibutuhkan untuk mendorong terjadinya reaksi enzimatik spesifik dan memonitor laju aktivitasnya. Sebagai penambah kenyamanan bagi Anda dalam melakukan penelitian, dalam kita biasanya ada juga senyawa untuk kontrol (misalnya inhibitor enzim selektif) untuk membedakan aktivitas enzimatik spesifik dengan sinyal background.

Topik Penelitian:

· Mitochondrial Biology · Oxidative Damage · Cellular Metabolism · Epigenetics · Lipid Metabolism

Assay kit aktivitas enzim ini mengandung component sebagai berikut:

  • Senyawa kontrol positif (jika dibutuhkan)
  • Senyawa kontrol negative (jika dibutuhkan)
  • Substrat, activator, and indikator
  • 96-well plate

Gambar 4. Format pembacaan Kit Aktivitas Enzim Cayman

E.   Inhibitor Screening Assay atau Assay Skrining Inhibitor

Inhibitor enzim adalah molekul yang mengganggu jalur reaksi normal antara enzim dan substrat. Inhibisi enzim spesifik oleh obat dapat bermanfaat secara medis. Oleh karena itu, memahami mekanisme penghambatan enzim itu sangat penting. Ada empat jenis penghambatan enzim – kompetitif, non-competitive, tidak kompetitif dan bunuh diri. Dari jumlah tersebut, tiga jenis pertama bersifat reversibel. Yang terakhir tidak.

Inhibitor Screening Assay dari Cayman dilengkapi dengan component yang dibutuhkan untuk pembacaan secara quantitative adanya aktivitas enzim yang dapat diaplikasikan dalam identifikasi molekul kecil inhibitor dari pustaka bahan kimia. Format assay TR-FRET ditujukan untuk mengkarakterisasi secara cepat ligan untuk studi SAR (Structure–Activity Relationship) dari senyawa epigenetik dalam format high-throughput.

Topik Penelitian:

· Nuclear Receptors

· Protein Enzymes (deaminases, peptidases)

· Bromodomains and Tudor Domains

· Epigenetic Enzymes (acetyltransferases, deacetylases methyltransferases, demethylases)

· Lipid Binding Proteins

· Lipid Enzymes (peroxidases, lipases, synthases, cyclooxygenases, lipoxygenases, hydrolases)

Gambar 5. Format pembacaan Inhibitor Screening Assay Cayman

F.   Preparasi Sample

Kit persiapan sampel dan perlengkapan dari diperuntukkan untuk mendukung optimasi dan mempersiapkan sampel untuk analisa assay.

Topik Penelitian:

· IP Columns & Sorbent Cartridges · Equipment and Consumables · Sample Collection · Isolation Kits

Legenda gambar:
S=substrat, E=Enzim, I=inhibitor

Sumber:
Assay Kits. Cayman Chemical. 2020. Versi online:

https://www.caymanchem.com/cms/caymanchem/LiteratureCMS/Assay%20Kits.pdf