Pengertian ELISA

Enzyme linked immunosorbent assay biasa disingkat ELISA adalah metode yang banyak digunakan untuk mendeteksi dan mengukur protein spesifik dalam sampel kompleks. Awalnya digunakan oleh Engvall dan Perlmann (1971), metode ini memungkinkan analisis sampel protein yang diimobilisasi dalam sumur pelat mikro menggunakan antibodi spesifik.

ELISA biasanya dilakukan pada pelat polistiren 96-sumur atau 384-sumur, yang secara pasif mengikat antibodi dan protein. Pengikatan dan imobilisasi reagen inilah yang membuat ELISA mudah dirancang dan dilakukan. Reagen ELISA yang diimobilisasi ke permukaan pelat mikro memudahkan untuk memisahkan bahan yang terikat dari bahan yang tidak terikat selama pengujian. Kemampuan untuk menggunakan antibodi afinitas tinggi dan membilas bahan terikat non-spesifik menjadikan ELISA sebagai metode andal untuk mengukur analit spesifik dalam preparat kasar.

Meskipun banyak varian ELISA telah dikembangkan dan digunakan dalam kondisi yang berbeda, semuanya bergantung pada 4 elemen dasar yang sama:

● Pelapisan/penangkapan (Coating/Capture) —imobilisasi antigen secara langsung atau tidak langsung ke permukaan sumur pelat mikro polistiren.
● Blocking Pelat —penambahan protein atau molekul lain yang tidak relevan untuk menutupi semua situs pengikatan permukaan tak jenuh dari sumur pelat mikro.
● Probing/deteksi—inkubasi dengan antibodi-spesifik antigen yang berikatan dengan antigen.
● Pengukuran sinyal—deteksi sinyal yang dihasilkan langsung (direct) atau sekunder pada antibodi spesifik.

Berikut merupakan perbedaan format ELISA kit komersial yang tersedia di pasaran. Ada yang hanya berupa antibody pairs, yaitu pasangan antibodi primer dan sekunder yang telah dioptimasi untuk ELISA. Juga ada ELISA kit yang pengerjaannya di bawah 3 jam saja, misalnya saja Quikey ELISA kit dari Elabscience.

Tabel perbedaan format ELISA kit

ELISA dirancang untuk mengukur jumlah target yang terikat antara pasangan antibodi yang cocok (matched antibody pair). Antibodi spesifik target dilapisi ke dasar sumur pelat mikro, biasanya membutuhkan waktu inkubasi semalam. Sampel, standar, atau kontrol kemudian ditambahkan ke dalam sumur-sumur ini dan mengikat antibodi yang diimobilisasi (capture antibody). Sandwich dibentuk dengan penambahan antibodi kedua (detection antibody), larutan substrat ditambahkan yang bereaksi dengan kompleks enzim-antibodi-target untuk menghasilkan sinyal yang terukur. Intensitas sinyal ini berbanding lurus dengan konsentrasi target yang ada dalam spesimen asli.

Perbedaan Coated dan Uncoated ELISA Kit

Coated ELISA kit

Coated ELISA kit adalah kit ELISA siap pakai (ready to use) yang tersedia secara komersial untuk mendeteksi ratusan sitokin, kemokin, faktor pertumbuhan, analit neurobiologi dan target lainnya dalam berbagai area penelitian. Coated ELISA kit ini berisi semua reagen lengkap yang dibutuhkan untuk menjalankan prosedur ELISA. Reagen ELISA tersebut di antaranya adalah pelat antibodi pra-pelapisan, antibodi pendeteksi, buffer, pengencer, standar dan substrat.

Berikut contoh komponen ELISA kit Elabscience Human Interleukin 8 (IL-8) nomor katalog E-EL-H6008.

Gambar 1. Komponen Coated ELISA kit Interleukin 8 (ready to use)

Uncoated ELISA kit

Uncoated ELISA merupakan format ELISA yang dirancang untuk para peneliti yang dananya terbatas namun sampelnya banyak. Memang prosesnya memakan waktu lebih lama dibanding pengerjaan ELISA ready to use, namun itu semua sebanding dengan harga yang lebih rendah dan juga dimungkinkan modifikasi uji ELISA yang dilakukan.

Sebagai contoh Elabscience Human Interleukin 8 (IL-8) Uncoated ELISA Kit catalog number: E-UNEL-H0099, berisi pasangan antibodi yang telah dicocokkan sebelumnya, dan reagen untuk melakukan uji ELISA untuk mendeteksi dan mengukur kadar protein IL-8 pada manusia.

Gambar 2. Komponen Uncoated ELISA kit Interleukin 8

Jika order uncoated ELISA kit, pelanggan direkomendasikan untuk sekalian order Ancillary Reagent Kit (Cat No. E-ELIR-K001), yang berisi semua reagen yang dibutuhkan selain pada gambar 2 di atas. Ancillary Reagent Kit ini cukup untuk pengerjaan 5×96 test ELISA.

Marker Uncoated ELISA Kit Best Seller

Selain Elabscience terdapat pula beberapa merk lainnya sebagai manufaktur uncoated ELISA kit misalnya saja Invitrogen (grup Thermo). Hampir semua ELISA kit yang dijual oleh merk Invitrogen berikut, ada juga pada merk Elabscience.

● iga mouse uncoated elisa kit (Elabscience; E-UNEL-H0070)
● invitrogen mouse il-6 uncoated elisa (Elabscience; E-UNEL-M0070)
● invitrogen mouse tnf alpha uncoated elisa kit (Elabscience; E-UNEL-M0103)
● human ifn gamma uncoated elisa invitrogen (Elabscience; E-UNEL-M0043)
● il-2 human uncoated elisa kit (Elabscience; E-UNEL-M0065)
● invitrogen human tnf alpha uncoated elisa (Elabscience; E-UNEL-H0175)
● il-8 human uncoated elisa kit (Elabscience; E-UNEL-H0099)
● igg (total) human uncoated elisa kit (Elabscience; E-UNEL-H0079)

Untuk spesifikasi, kedua merk hampir sama. Namun, dengan kualitas hampir setara, harga Elabscience ELISA kit lebih terjangkau, pengiriman lebih cepat dan kisaran produk lebih lengkap. Selain itu juga, produk Elabscience sudah banyak digunakan oleh para peneliti pada jurnal-jurnal ilmiah kelas dunia.

Berikut merupakan list uncoated ELISA kit merk Elabscience.

Human Uncoated ELISA Kit (5x96T; 15x96T)

Mouse Uncoated ELISA Kit (5x96T; 15x96T)

Rat Uncoated ELISA Kit (5x96T; 15x96T)